Zawartość
Barwienie metodą Grama lub po prostu metodą Grama to szybka i prosta technika, której celem jest różnicowanie bakterii zgodnie z charakterystyką ich ściany komórkowej po ekspozycji na różne barwniki i roztwory.
Dzięki barwieniu metodą Grama można sprawdzić, oprócz kształtu bakterii, także kolor, jaki nabierają, a wynik ten jest ważny dla określenia innych strategii identyfikacji gatunku bakterii i wskazania przez lekarza postępowania profilaktycznego zgodnie z zaleceniami. cechy obserwowane mikroskopowo.
Barwienie metodą Grama jest zwykle wykonywane rutynowo w laboratorium i jest częścią badania bakterioskopowego. Zrozum, czym jest bakterioskopia i jak to się robi.
Jak przebiega barwienie metodą Grama
Barwienie metodą Grama to szybka, praktyczna i niedroga metoda identyfikacji bakterii odpowiedzialnych za infekcje, przydatna dla lekarzy do wskazania profilaktycznego leczenia infekcji, która może wystąpić, ponieważ znane są specyficzne cechy tych grup bakterii,
Barwienie metodą Grama odbywa się w 7 głównych etapach, jednak protokół może się różnić w zależności od laboratorium:
- Umieścić kilka kolonii bakterii na szkiełku, dodając kroplę wody w celu ułatwienia homogenizacji kolonii;
- Niech trochę wyschnie, a ostrze może szybko przejść przez płomień, aby sprzyjać wysychaniu, jednak ważne jest, aby zwracać uwagę na temperaturę, ponieważ jeśli temperatura jest zbyt wysoka, może dojść do zmiany w strukturze bakterii, co może zakłócić wynik egzamin;
- Kiedy szkiełko wyschnie, przykryj fioletowym krystalicznym barwnikiem i pozostaw na około 1 minutę;
- Umyj szkiełko pod strumieniem bieżącej wody i przykryj szkiełko lugolem, który ma za zadanie utrwalenie niebieskiego barwnika i pozostaw na 1 minutę. Oba typy bakterii mogą wchłonąć kompleks utworzony przez barwnik i lugol, zmieniając kolor na niebieski;
- Następnie umyj szkiełko pod bieżącą wodą i nanieś 95% alkohol, pozostawiając na 30 sekund. Alkohol jest odpowiedzialny za rozpuszczenie błony lipidowej tworzącej bakterie Gram-ujemne, a tym samym usunięcie kompleksu utworzonego między barwnikiem a lugolem, odbarwiając te bakterie. Jednak w przypadku bakterii Gram-dodatnich alkohol odwadnia ścianę komórkową bakterii Gram-dodatnich, powodując kurczenie się porów i sprawiając, że stają się one nieprzepuszczalne;
- Następnie ponownie umyj pod bieżącą wodą i przykryj szkiełko drugim barwnikiem, fuksyną lub safraniną i pozostaw na 30 sekund;
- Następnie umyj szkiełko pod bieżącą wodą i pozostaw do wyschnięcia w temperaturze pokojowej.
Gdy preparat wyschnie, można nałożyć kroplę olejku imersyjnego i obserwować preparat pod mikroskopem obiektywem 100x, umożliwiając sprawdzenie obecności lub braku bakterii, drożdży i komórek nabłonka.
Po co to jest
Głównym celem barwienia metodą Grama jest różnicowanie bakterii zgodnie z charakterystyką ściany komórkowej i ogólną morfologią. Zatem, zgodnie z charakterystyką obserwowaną pod mikroskopem, bakterie można podzielić na:
- Bakterie Gram-dodatnie, które są wizualizowane na niebiesko, ponieważ nie są odbarwione przez alkohol, ponieważ mają grubszą ścianę komórkową, a ich pory zwężają się pod wpływem lugolu;
- Bakterie Gram-ujemne, które są uwidaczniane na różowo / fioletowo, ponieważ są odbarwione alkoholem i zabarwione safraniną lub fuksyna.
Po wizualizacji bakterii pod mikroskopem możliwe jest, że dalsze badania zostaną przeprowadzone w laboratorium w celu identyfikacji gatunku bakterii. Jednak poprzez Grama oraz skojarzenie z objawami przedmiotowymi i podmiotowymi prezentowanymi przez daną osobę lekarz może wskazać leczenie profilaktyczne do czasu uzyskania wyników bardziej szczegółowych badań, gdyż w ten sposób można zmniejszyć tempo namnażania się bakterii i zapobiec powikłaniom.